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发表刊物：畜牧兽医学报

关键字：破骨细胞;腺苷酸活化蛋白激酶;自噬

摘要：为了探究氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸（AICAR）对破骨细胞自噬及分化能力的影响,以BALB/c小鼠骨髓巨噬细胞诱导分化形成的破骨细胞为研究对象,添加0.5 mmol·mL-1AICAR（AMPK激活剂）处理4 h后,抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色鉴定破骨细胞;CCK-8法检测破骨细胞存活率;高内涵系统分析TRAP+细胞比率、面积、荧光强度及圆度;蛋白免疫印迹（Western blot）和荧光定量聚合酶链式反应方法（qRT-PCR）检测AMPK、NFATc1、c-Fos、CTSK、TRAP、（LC3-Ⅱ）、ATG5、Beclin1、p62的mRNA和蛋白水平;激光共聚焦显微镜观察EGFP-pmCherry-LC3荧光聚点。结果显示,通过30 ng·mL-1M-CSF和60 ng·mL-1RANKL诱导分化4 d的细胞TRAP染色后大部分呈阳性且细胞核数目≥3。AICAR处理后,与对照组相比,细胞存活率无显著差异（P>0.05）,但细胞面积、TRAP+（细胞核数目≥3）细胞率、TRAP荧光强度显著下降（P<0.05）。AICAR组破骨细胞c-Fos、TRAP（P<0.01）、p62（P<0.05）的mRNA水平显著下降,LC3、ATG5的mRNA水平显著升高（P<0.05）。AICAR处理致AMPKα蛋白磷酸化水平极显著升高（P<0.01）,NFATc1、c-Fos、CTSK、p62（P<0.01）和TRAP（P<0.05）蛋白表达量显著下调,LC3-Ⅱ、ATG5和Beclin1蛋白表达水平极显著上调（P<0.01）。转染LC3质粒结果显示AICAR处理后LC3黄色及红色荧光聚点数目增多,绿色荧光聚点数目减少。结果表明0.5 mmol·mL-1AICAR作用4 h可激活破骨细胞AMPKα,增强破骨细胞的自噬水平,但抑制了破骨细胞的分化。

合写作者：陈苗苗,仝锡帅,郑嘉铭,赵鸿雁,顾建红,刘宗平

论文类型：卓越期刊、CSCD、

卷号：50

期号：11

页面范围：2339-2347

是否译文：否

发表时间：2019-11-19